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RNATrip(總RNA提取試劑)

RNA Trip成功避開(kāi)各種商業(yè)RNA提取試劑盒的種種弊端，采用新的技術(shù)和工藝，在提取過(guò)程中既能有效裂解組織細(xì)胞，強(qiáng)烈抑制RNA酶活性，保護(hù)RNA免受降解，同時(shí)也能極為有效地分離去除DNA和蛋白質(zhì)。RNAtrip使RNA分離如同提取質(zhì)粒DNA一樣簡(jiǎn)單可靠，可在30-60分鐘內(nèi)完成，獲得*純度的總RNA沉淀，可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保護(hù)、Poly(A) mRNA純化、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：

1.         組織細(xì)胞破碎與裂解（請(qǐng)?jiān)诒喜僮鳎?/p>

(1)      固體組織。按比例每50-100 mg組織加1 mL RNAtrip試劑進(jìn)行組織勻漿裂解。

(2)      培養(yǎng)細(xì)胞。每5-10´10⁶個(gè)細(xì)胞加1 mL RNAtrip試劑裂解。

(3)      液體標(biāo)本：如體液、尿液、全血。每100ml液體樣品加1 mL RNAtrip裂解。

2.     將組織細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管，置冰上10分鐘。

3.         加入0.2體積的氯反(0.2mL)，充分顛倒混勻，冰浴5 分鐘，溶液分相。有時(shí)分相不明顯，不影響提取。

4.         12,000 ´ g 4 ^oC離心10分鐘，溶液分為兩相。RNA在上層水相，下層為有機(jī)相，兩相界面是一層薄膜其厚度與組織細(xì)胞類(lèi)型和多少有關(guān)。小心吸出0.5mL上層水相轉(zhuǎn)移到新離心管。

5.         加入等體積異丙醇(0.5mL)于上清液充分混勻。冰上孵育10 分鐘沉淀RNA。

6.         12,000 ´ g，4 ^oC 離心10分鐘。管底可見(jiàn)少許RNA沉淀。

7.         棄上清。立即加入1 mL 用DEPC水配制的75%乙醇，顛倒混勻數(shù)次洗滌沉淀。12,000 ´ g離心5分鐘。棄上清，盡量*吸去管壁上的液體。

8.         敞開(kāi)管口空氣干燥5-10分鐘使殘留液體揮發(fā)，略微干燥RNA沉淀即可。用50-100 ml自備的DEPC處理的高壓消毒純水或TE溶解沉淀。RNA溶液可保存于－70 ^oC或液氮中。

RNATrip(總RNA提取試劑)