高鐵血紅蛋白（MetHb）測(cè)試盒

一、試劑組成及配制：（50T/48 樣）

試劑一：血紅蛋白測(cè)定濃縮液 1mL×2 支，2～8℃保存。

血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液的配制：臨用前將濃縮液用雙蒸水

1∶99 稀釋，即 100 倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。配好

的試劑 2～8℃避光保存，可存放 1 個(gè)月以上。

試劑二：高鐵血紅蛋白測(cè)定濃縮液，30mL×1 瓶，2～8℃

保存。

高鐵血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液的配制：濃縮液∶雙蒸水＝

1∶9 稀釋，即 10 倍稀釋，可存放 6 個(gè)月以上。

試劑三：制作還原血紅蛋白曲線用

①、白色粉劑×1 支，2～8℃避光保存。

②、稀釋液，1mL×1 支，2～8℃保存。

試劑三應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入 1mL 稀釋液，

現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光。

試劑四：制作高鐵血紅蛋白曲線用

①、磚紅色粉劑×1 支，2～8℃避光保存

②、稀釋液，1mL×1 支，2～8℃保存。

試劑四應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入 1mL 稀釋液，

現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光。

二、試劑組成及配制：（100T/96 樣,貨號(hào) A102-1-2）

試劑一：血紅蛋白測(cè)定濃縮液 1mL×4 支，2～8℃保存。

血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液的配制：臨用前將濃縮液用雙蒸水

1∶99 稀釋，即 100 倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的

試劑 2～8℃避光保存，可存放 1 個(gè)月以上。

試劑二：高鐵血紅蛋白測(cè)定濃縮液，60mL×1 瓶，2～8℃

保存。

高鐵血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液的配制：濃縮液∶雙蒸水＝

1∶9 稀釋，即 10 倍稀釋，可存放 6 個(gè)月以上。

試劑三：制作還原血紅蛋白曲線用

①、白色粉劑×1 支，2～8℃避光保存。

②、稀釋液，1mL×1 支，2～8℃保存。

試劑三應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入 1mL 稀釋液，

現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光。

試劑四：制作高鐵血紅蛋白曲線用

①、磚紅色粉劑×1 支，2～8℃避光保存

②、稀釋液，1mL×1 支，2～8℃保存。

試劑四應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入 1mL 稀釋液，

現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光。

三、操作步驟：

1、制備抗凝全血：取全血立即加入到肝素抗凝管內(nèi)，加

蓋封口，輕輕顛倒混勻。

2、血紅蛋白含量的測(cè)定：取 0.01mL 全血與 2.5mL 的 100

倍稀釋的試劑一應(yīng)用液（血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液），混

勻，靜置 5 分鐘后，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，540nm

處測(cè)定各管吸光度值。

3、高鐵血紅蛋白測(cè)定： 取 0.05mL 全血，加入 2.5mL

的試劑二稀釋?xiě)?yīng)用液（即高鐵血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液），

混勻，靜置 5 分鐘后，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定

630nm 處及 602nm 處吸光度值。如果沒(méi)有雙波長(zhǎng)的

分光光度計(jì)則可以先測(cè)定各管 630nm 處吸光度值，

然后再測(cè)各管 602 nm 處吸光度值。但一定要注意各

管的編號(hào)不要弄錯(cuò)。

五、注意事項(xiàng)：

①、取血后應(yīng)在 1 小時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，否則影響測(cè)定結(jié)果，

因?yàn)榧t細(xì)胞中的還原酶可使高鐵血紅蛋白逐漸還

原，使結(jié)果降低。但可放-20℃以下冷凍保存，如果

血樣較多，可將全血分成幾小管，每次測(cè)試可取其

一小管，余下各管仍保存-20℃以下以備重復(fù)測(cè)試，

其結(jié)果不受影響。

②、本實(shí)驗(yàn)可用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)測(cè)定，可同時(shí)測(cè)定

602nm 處及 630nm 處吸光度值，進(jìn)行計(jì)算。也可用

單波長(zhǎng)分光光度計(jì)測(cè)定，可以先測(cè)定各管 630nm 處

吸光度值，然后再測(cè)各管 602 nm 處吸光度值。但

一定要注意各管的編號(hào)不要弄錯(cuò)。

③、如果您實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)沒(méi)有雙波長(zhǎng)掃描功能，可

以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接用本所實(shí)驗(yàn)室 R 與 r 均為常

數(shù)，R=1.81；r=0.14。

④、所用器皿要干凈。

七、檢測(cè)意義：

體內(nèi)一氧化氮彌散入血后，很快與氧合血紅蛋白結(jié)合形

成高鐵血紅蛋白（methemoglobin，MetHb），NO 與 MetHb 變

化相關(guān)，故全血 MetHb 檢測(cè)近年來(lái)受到臨床的廣泛重視。同

時(shí)血液中高鐵血紅蛋白含量的測(cè)定對(duì)接觸芳香族氨基、硝基

化合物所引起的中毒性疾病的診斷與治療，有重要的意義。

八、測(cè)定原理：

高鐵血紅蛋白在 630nm 波長(zhǎng)處有一特征吸收峰，而高鐵

血紅蛋白（MetHb）和還原血紅蛋白（Hb）在 602nm 波長(zhǎng)處

光密度值相等，利用此關(guān)系可以通過(guò)相應(yīng)的公式算出高鐵血

紅蛋白含量。

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