支原體-染色液(Dienes)

產品簡介：

支原體染色液(Dienes染色液)是一種經典的利用天青美藍染色檢測支原體污染的試劑，

經常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞以及組織切片的細胞凋亡檢測，該試劑檢測細胞含量范圍一

般為 0.1～1×106 之間，Dienes 染色液亦可用于泌尿生殖道感染細菌的染色鑒別。該試劑

僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、PBS 或生理鹽水

2、載玻片、蓋玻片

3、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁細胞

1、取潔凈蓋玻片在 70%乙醇中浸泡 5 分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用無菌 PBS

或生理鹽水洗滌 3 次，再用細胞培養(yǎng)液洗滌 1 次。

2、將蓋玻片置于 6 孔板或其他培養(yǎng)皿內，接種細胞培養(yǎng)過夜，使融合率約為 50%～80%。

3、加入 Dienes 染色液覆蓋表面，孵育 1～2min。

4、棄染色液，PBS 或生理鹽水洗 2 次，每次 3min，吸盡液體。

5、顯微鏡下觀察。

(二)懸浮細胞

1、低速離心后吸去大部分液體保留約 50μl 液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡

量使細胞分布均勻。

2、稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。

3、加入 Dienes 染色液覆蓋表面，孵育 1～2min。

4、棄染色液，PBS 或生理鹽水洗 2 次，每次 3min，吸盡液體。

(三)懸浮細胞

1、用棉試子在載玻片上涂一層 Dienes 染色液，待干。

2、挑取細菌，置于載玻片上。

3、覆蓋玻片，密封，觀察菌落形態(tài)。

(四)支原體菌落

1、將

3、加入 Dienes 染色液覆蓋表面，孵育 1～2min。

4、棄染色液，PBS 或生理鹽水洗 2 次，每次 3min，吸盡液體。

染色結果：

支原體菌落呈藍色，L 型細菌菌落在短時間內呈藍色，但 30~60min 后逐漸褪色，呈無色。

注意事項：

1、在為了獲得細胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當

提高離心力或延長離心時間。

2、如染色太深不宜觀察，可用蒸餾水將染液稀釋 50~300 倍。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12 個月有效。

支原體-染色液(Dienes)