山-梨醇脫氫酶檢測(cè)試劑盒

（ Sorbitol dehydrogenase，SDH 分光光度法）

一、測(cè)定意義：

SDH（EC 1.1.1.14）催化山-梨醇脫氫生成果糖，是調(diào)

控生物體內(nèi)山-梨醇含量的關(guān)鍵酶之一。

二、測(cè)定原理：

SDH催化山-梨醇脫氫生成果糖，同時(shí)還原NAD+生成

NADH，測(cè)定340nm吸光度增加速率可以計(jì)算SDH活性。

三、儀器設(shè)備（自備）：

可調(diào)式移液器、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度

計(jì)、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

四、試劑組成：（50T/48 樣）

提取液：液體60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入15mL蒸

餾水，用不完的試劑仍4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入15mL

蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存。

五、操作步驟：

1、粗酶液提取：

⑴、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離

心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取

液體積（mL）500～1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌

或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰

浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10 秒，重復(fù)30

次）；8000g，4°C離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

⑵、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)1：5～

10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）

進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰

上待測(cè)。

⑶、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

山-梨醇脫氫酶檢測(cè)試劑盒