視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪片PAS染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

服務(wù)介紹：

視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪片PAS染色（Periodic Acid-Schiff Stain）是一種用于觀察視網(wǎng)膜血管網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和結(jié)構(gòu)的組織化學(xué)染色方法。PAS染色可以特異性地染色血管基底膜和糖原等碳水化合物成分，使血管網(wǎng)絡(luò)清晰可見，常用于研究視網(wǎng)膜血管的發(fā)育、病理變化以及糖尿病視網(wǎng)膜病變等疾病。

染色原理：

單獨(dú)剝?nèi)⊙矍蛞暰W(wǎng)膜，用胰-酶消化去除視網(wǎng)膜內(nèi)細(xì)胞只保留血管網(wǎng)，將血管網(wǎng)均勻地鋪在載玻片上進(jìn)行PAS染色。PAS染色又稱過(guò)碘酸雪夫染色。一般用來(lái)顯示糖原和其它多糖物質(zhì)。過(guò)碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛，再與Schiff氏液的無(wú)色品紅結(jié)合呈現(xiàn)紫紅色，復(fù)染蘇木素，細(xì)胞核呈藍(lán)色。毛細(xì)血管基底膜含有大量糖類物質(zhì)，經(jīng)PAS染色后呈現(xiàn)紫紅色，進(jìn)而將血管網(wǎng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)染出來(lái)。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、取材與固定：剝?nèi)⊙矍?，使?/span>4%多聚甲醛固定一段時(shí)間（如大鼠眼球固定12小時(shí)以上，整顆眼球4%PFA固定24小時(shí)以上）。

2、剝離與消化：剝離出視網(wǎng)膜，并使用胰-酶等消化液去除視網(wǎng)膜內(nèi)細(xì)胞，只保留血管網(wǎng)。

3、吹打與鋪片：將消化后的視網(wǎng)膜血管網(wǎng)進(jìn)行吹打，去除粘附在血管網(wǎng)上的細(xì)胞，直至血管網(wǎng)呈現(xiàn)透明狀。然后，將透明的視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪展在載玻片上。

4、PAS染色：晾干的血管網(wǎng)鋪片浸入自來(lái)水中5分鐘。取出切片，稍甩干多余的水分，切片入0.5%高碘酸浸染15分鐘，切片入純水浸洗3次，每次10秒。稍甩干切片多余的水分，切片浸入已經(jīng)提前恢復(fù)常溫的雪弗溶液中于暗處浸染20分鐘。取出切片，浸入裝有自來(lái)水的塑料盆中流水沖洗5分鐘，稍甩干切片多余的水分，入蘇木素染液染色5分鐘，自來(lái)水洗，鹽酸水溶液分化2秒，自來(lái)水洗，氨水水溶液返藍(lán)5秒，自來(lái)水洗。切片入無(wú)水乙醇3缸脫水，各5分鐘，二甲苯透明5分鐘，中性樹膠封片。

5、觀察與評(píng)估：染色完成后，通過(guò)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜血管網(wǎng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行評(píng)估。

染色結(jié)果：

視網(wǎng)膜毛細(xì)血管經(jīng)PAS染色后呈現(xiàn)紫紅色（或紅色），細(xì)胞核呈藍(lán)色。閉鎖毛細(xì)血管細(xì)胞核消失，且管腔萎-縮變細(xì)呈細(xì)線狀。

視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪片PAS染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途！