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組織細(xì)胞葡萄糖氧化酶法測(cè)定試劑盒

 原理：根據(jù)Trinder反應(yīng)原理^1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫(H₂O₂)；然后用過(guò)氧化物酶(POD)催化過(guò)氧化氫，使色原物質(zhì)(4-氨基安替比林)生成醌亞胺，顏色的深淺與葡萄糖濃度成正比。

適用范圍：適用于動(dòng)物實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞中葡萄糖含量的測(cè)定。

操作步驟：

一．組織細(xì)胞裂解：

1、動(dòng)物細(xì)胞：離心收集細(xì)胞后，通常情況下，可按比例每1x10⁶ 個(gè)細(xì)胞加入0.05-0.1mL裂解液，震蕩裂解后室溫靜置10分鐘。

2、實(shí)體組織：離心管精確稱(chēng)重，加入組織塊后再稱(chēng)重，二者相減(即減量稱(chēng)重法)計(jì)算組織重量(約50mg)。建議按每1mg組織加入5-10µl裂解液，用玻璃勻漿器或者電動(dòng)勻漿器勻漿破碎組織，勻漿后室溫靜置10分鐘。

二．裂解液處理：取適量上清液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，余下的裂解液可用BCA法蛋白定量試劑盒(P1511)進(jìn)行蛋白定量或－20ºC儲(chǔ)存。

三．工作溶液配制：按4:1比例，取8mL試劑R1與2mL試劑R2混合得到10mL 工作溶液。當(dāng)天使用或4ºC保存1周。

四．標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)?/strong>10mM葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水或與樣本緩沖液一致的液體稀釋為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。由于葡萄糖測(cè)定反應(yīng)的線性關(guān)系甚好且范圍很寬，通常設(shè)置黑體標(biāo)記的4管即可，一般不需要設(shè)置大于2~10mM的標(biāo)準(zhǔn)管，以此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線用來(lái)測(cè)定大于2mM葡萄糖濃度通常不會(huì)失真。世界衛(wèi)生組織(WHO)也可僅設(shè)置單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)管。

組織細(xì)胞葡萄糖氧化酶法測(cè)定試劑盒