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His（6xHis）單抗，His標(biāo)簽單抗又叫6×His標(biāo)簽單抗，或6×His單克隆抗體，用小鼠制備，HIS可被鎳柱吸附，用于純化重組蛋白。

Ni IDA Beads 可以用于各種表達(dá)來(lái)源(如大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞) 的組氨酸標(biāo)簽(6xHis-tagged)蛋白的純化。它是以 4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)

6xHis 標(biāo)簽，也稱為多組氨酸標(biāo)簽， His6 標(biāo)簽或 hexa 組氨酸標(biāo)簽, 是一種在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中目標(biāo)蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 個(gè)組氨酸殘基鏈接上所組成的氨基酸序列。這種標(biāo)簽通常在重組蛋白的純化中使用，這是因?yàn)榻M氨酸殘基的序列可以在特定的緩沖液條件下結(jié)合到幾種類型固定的離子上（比如鎳，鈷和銅）從而達(dá)到容易檢測(cè)和純化 His 標(biāo)簽蛋白的目的。
由于它的相對(duì)小的分子量，低的免疫原性，親水性和在去污劑和其他添加劑存在的情況下的易變性, 因此在天然和變性的條件下，多組氨酸標(biāo)簽是被*為廣泛使用的親和標(biāo)簽用于一系列的蛋白純化目的。
除此之外，它可以檢測(cè)和純化重組蛋白而無(wú)需使用蛋白特異性的抗體或探針，同時(shí)抗 His 標(biāo)簽抗體的存在用于 His 標(biāo)簽蛋白的檢測(cè)中使 6xHis 標(biāo)簽更加的普遍和受歡迎。
親和純化蛋白
在大腸桿菌和其他原核系統(tǒng)中表達(dá)的多組氨酸標(biāo)簽重組蛋白通常使用固定的金屬離子親和色譜來(lái)純化或稱為 IMAC. 在這個(gè)過程中，支撐物 (通常是珠狀瓊脂糖凝膠或磁珠顆粒) 用合適的耦合試劑來(lái)進(jìn)行衍生，比如氨三乙酸 nitrilotriacetic acid (NTA) 或亞氨乙酸 iminodiacetic acid (IDA).
這些螯合的基團(tuán)會(huì)固定所需要的二價(jià)金屬離子 (比如鎳，銅，鈷和鋅)，從而這些金屬離子負(fù)責(zé)結(jié)合和分離混合液蛋白中的目標(biāo)分子。在選擇使用哪個(gè)配基上，你需要考慮 IMAC 樹脂的結(jié)合能力主要取決于被純化蛋白的性質(zhì)和在純化過程中所使用的金屬離子。
注意：需要更加深入完整的了解如何選擇的螯合試劑來(lái)達(dá)到我的目的，請(qǐng)參考我們之前發(fā)的一篇文章，- -「對(duì)于 NTA 和 IDA 配基你需要知道哪些」。
鎳，鈷，銅是進(jìn)行純化 His 標(biāo)簽蛋白的被廣泛使用的離子，由于他們?cè)谒芤褐袑?duì)于組氨酸和半胱氨酸良好的親和性。在這三個(gè)離子中，鎳是泛使用的金屬離子，它呈現(xiàn)出的親和性和選擇性對(duì)于 His 標(biāo)簽蛋白. 然而，它也會(huì)非特異性的結(jié)合包含組氨酸群的內(nèi)源蛋白。
從另一個(gè)側(cè)面講，鈷提供特異性的結(jié)合和組氨酸標(biāo)簽因此當(dāng)純度是首要選擇時(shí)鈷是二價(jià)陽(yáng)離子的選。
銅離子和鎳鈷離子相比和 His 標(biāo)簽蛋白的結(jié)合非常強(qiáng)勁，但是它的特異性在三種離子中是弱的。由于這個(gè)原因，當(dāng)純度不是主要的目的時(shí)銅離子 IMAC 被使用。

His（6xHis）單抗