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信帆生物供應(yīng)寨卡病毒重組抗原標(biāo)記抗體，寨卡病毒（Zika Virus， ZIKV）是一種RNA病毒，屬于黃病毒科中的黃病毒屬，主要通過(guò)蚊子傳播。近幾年來(lái)，寨卡病毒在美洲地區(qū)爆發(fā)流行，感染人數(shù)達(dá)數(shù)百萬(wàn)之多，并且有蔓延到其它地區(qū)的趨勢(shì)。

寨卡病毒（Zika Virus， ZIKV）是一種RNA病毒，屬于黃病毒科中的黃病毒屬，主要通過(guò)蚊子傳播。近幾年來(lái)，寨卡病毒在美洲地區(qū)爆發(fā)流行，感染人數(shù)達(dá)數(shù)百萬(wàn)之多，并且有蔓延到其它地區(qū)的趨勢(shì)。分析顯示，寨卡病毒感染與新生兒小頭癥及成人的格林巴列綜合癥高度相關(guān)。動(dòng)物試驗(yàn)也證明寨卡病毒可感染腦神經(jīng)組織，導(dǎo)致小頭癥及其它出生缺陷。因此，寨卡病毒對(duì)公共健康已經(jīng)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。但目前還沒(méi)有商業(yè)化的疫苗來(lái)預(yù)防寨卡病毒感染。

為了開發(fā)寨卡病毒基因工程疫苗，碩士研究生屈攀科等在黃忠和金俠的共同指導(dǎo)下，利用果蠅S2表達(dá)系統(tǒng)制備了基于寨卡病毒包膜蛋白（E）的不同長(zhǎng)度重組蛋白，進(jìn)一步在小鼠模型上評(píng)價(jià)這些重組蛋白疫苗的免疫原性和抗病毒保護(hù)效果。研究結(jié)果顯示，E蛋白的胞外區(qū)（稱為E80）及其結(jié)構(gòu)域III（稱為EDIII）均可在S2系統(tǒng)中高效表達(dá)；E80和EDIII疫苗都能在小鼠中誘導(dǎo)抗原特異性的抗體和T細(xì)胞免疫應(yīng)答；在自主研發(fā)的寨卡病毒感染小鼠模型中，E80免疫小鼠血清和EDIII免疫小鼠血清都具有顯著的抗病毒保護(hù)效果。值得指出的是，在相同劑量的情況下，EDIII疫苗所誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)比E80疫苗所誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)更高，而且能夠提供更強(qiáng)的保護(hù)作用。以上結(jié)果表明，S2細(xì)胞來(lái)源的EDIII是一個(gè)非常有前景的寨卡病毒基因工程疫苗原型，值得開展后續(xù)的前和研發(fā)。

建立檢測(cè)非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS1)抗原的免疫層析膠體金試紙方法,用于寨卡病毒(ZIKV)感染的早期診斷。方法對(duì)已獲得的5株人源抗ZIKV NS1的單克隆抗體(ZKns2E11、ZKns3G2、ZKns4B8、ZKns4F10、ZKns14G5)采用生物膜層光學(xué)干涉法進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn),以得到它們?cè)诳乖Y(jié)合位點(diǎn)的相互關(guān)系并根據(jù)抗體結(jié)合抗原表位的不同將其進(jìn)行分類,又通過(guò)兩兩隨機(jī)組合配對(duì)方法篩選出佳捕獲抗體及包被抗體,制備成膠體金試紙。分別用重組NS1蛋白、感染ZIKV細(xì)胞培養(yǎng)上清液以及感染登革病毒(DENV)血清/血漿多種檢測(cè)樣品以獲得準(zhǔn)確的特異性和敏感性。其中病毒定量采用FFA(focus-forming assay)方法。結(jié)果在競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,根據(jù)抗體與抗原結(jié)合的剩余結(jié)合率(<20%被認(rèn)為強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系即結(jié)合位點(diǎn)相似甚至相同,>60%被認(rèn)為無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系即位點(diǎn)不同),抗體大致分為兩類,并通過(guò)兩兩配對(duì)篩選出2株結(jié)合位點(diǎn)不一致的佳配對(duì)抗體(ZKns2E11、ZKns3G2),終建立檢測(cè)ZIKV NS1抗原膠體金試紙的快速診斷方法。在試紙敏感性分析中,ZIKV重組NS1蛋白為31.25 ng/mL時(shí)肉眼仍可觀測(cè)到陽(yáng)性條帶的出現(xiàn),以2×10~4FFU/mL的ZIKV病毒量感染細(xì)胞所釋放的NS1蛋白仍可被檢測(cè)到。試紙?jiān)谄涮禺愋陨?無(wú)論是重組蛋白、感染病毒細(xì)胞培養(yǎng)上清液還是樣本,與DENV均不交叉,表現(xiàn)出良好的特異性。

寨卡病毒重組抗原標(biāo)記抗體