天狼猩紅染色實驗代測

天狼猩紅染色實驗簡介：

天狼猩紅(Picrosirius Red )染色可用于區(qū)分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型膠原，由于天狼猩紅是一種強酸性陰離子染料，可與呈堿性的膠原反應(yīng)，使膠原纖維在偏振光照射時，產(chǎn)生明顯的雙折光現(xiàn)象。不同的膠原纖維具有不同的旋光性，在偏振光顯微鏡下呈現(xiàn)相異的顏色，借以區(qū)分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型膠原，Ⅰ型纖維：緊密排列， 顯示的雙折光性，呈黃色或紅色的纖維；Ⅱ型纖維：顯示弱的雙折光，呈多種色彩的疏松網(wǎng)狀分布；Ⅲ型纖維：顯示弱的雙折光，呈綠色的細(xì)纖維；Ⅳ型纖維：顯示弱的雙折光的基膜，呈淡黃色。

天狼猩紅染色實驗步驟

1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。

2、天狼猩紅染色液染色：切片入飽和苦味酸天狼猩紅染色液內(nèi)染色8min。

3、漂洗：切片入*漂洗數(shù)分鐘，顯微鏡下觀察滿意為止。

4、封片：切片于60°烤箱烤干后于二甲苯透明5min，中性樹膠封片。

5、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

染色結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下膠原纖維紅色，背景黃色。

注意事項：

1、染液配制時,飽和苦味酸一定要過飽和,配制時要長時間攪拌后還有不溶的情況下才為飽和的。
2、飽和天狼猩紅染液是一種兩色混合染液,兩種顏色同時都有作色能力,而且存在一定得制約平衡關(guān)系,所以染液在使用時隨著帶入的雜質(zhì)過多,可能會影響這種平衡關(guān)系,所以建議染色結(jié)果不對時,應(yīng)立即更換染液。
3、天狼猩紅染色前，需要盡量將水甩干，避免多次染色后帶入較多的水分使染液的染色能力下降。
4、染色后脫水時使用新的無水乙醇，并快速脫水，長時間脫水會影響染色結(jié)果。
5、如果需要染核，可以先染完天狼猩紅后在用蘇木素染核。

天狼猩紅染色實驗代測