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信帆生物提供PCR技術(shù)服務(wù)，PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)

逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。

由一條RNA單鏈轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（cDNA）稱作“逆轉(zhuǎn)錄”，由依賴RNA的DNA聚合酶（逆轉(zhuǎn)錄酶）來完成。

隨后，DNA的另一條鏈通過脫氧核苷酸引物和依賴DNA的DNA聚合酶完成，隨每個(gè)循環(huán)倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互補(bǔ)DNA。

RT-PCR的指數(shù)擴(kuò)增是一種很靈敏的技術(shù)，可以檢測(cè)很低拷貝數(shù)的RNA。RT-PCR廣泛應(yīng)用于遺傳病的診斷，并且可以用于定量監(jiān)測(cè)某種RNA的含量。檢測(cè)基因表達(dá)的方法，參見Northern Blot法。

RT-PCR的關(guān)鍵步驟是在RNA的反轉(zhuǎn)錄，要求RNA模版為完整的且不含DNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。常用的反轉(zhuǎn)錄酶有兩種，即鳥類成髓細(xì)胞性白細(xì)胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反轉(zhuǎn)錄酶和莫羅尼鼠類白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反轉(zhuǎn)錄酶。

在完成逆轉(zhuǎn)錄過程之后,通過PCR進(jìn)行定量分析的時(shí)候，隨著技術(shù)的發(fā)展，real-time PCR（實(shí)時(shí)熒光PCR）或ddPCR（數(shù)字PCR）技術(shù)也被用來做定量分析，它們比普通PCR進(jìn)行定量分析時(shí)靈敏度更高，定量更精確。

oligo：多聚體，相當(dāng)于mRNA引物
AMV RT：禽類成髓細(xì)胞瘤病毒逆轉(zhuǎn)錄酶
MMLV RT：莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶
dNTPs：脫氧核苷酸
RNase：RNA水解酶
PCR Buffer：RT-PCR緩沖液
MgCl2：2價(jià)鎂離子

信帆生物提供PCR技術(shù)服務(wù)，PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)

一、服務(wù)介紹

實(shí)時(shí)PCR（real-time PCR），屬于定量PCR（Q-PCR）的一種，以一定時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對(duì)定量?？蓹z測(cè)mRNA，microRNA，lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

二、服務(wù)流程

1、引物設(shè)計(jì)與合成

2、DNA/RNA抽提

3、反轉(zhuǎn)錄（針對(duì)RNA）

4、上機(jī)定量分析

三、客戶提供

1、全血、組織或細(xì)胞。細(xì)胞：細(xì)胞數(shù)>10⁷，組織：總量>200mg，DNA或RNA樣品：總量>5ug

2、引物，或由信帆生物提供。

3、基因信息：目的基因名稱、物種和序列（或GenBank Accession Number）。

四、交付內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：詳細(xì)操作步驟

原始數(shù)據(jù)：溶解曲線圖，擴(kuò)增曲線圖，ct值

信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品：進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免檢測(cè)服務(wù)：進(jìn)口放免檢測(cè)服務(wù)，國(guó)產(chǎn)放免檢測(cè)服務(wù)，進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免檢測(cè)服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù)：放免代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)，免疫組化代測(cè)，熒光定量PCR代測(cè)，病理細(xì)胞染色代測(cè)，生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。