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2020-07-01祝賀中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院文章發(fā)表于《實(shí)驗(yàn)植物學(xué)雜志》
2016-08-12
產(chǎn)品型號(hào)：
更新時(shí)間：2025-01-30
所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等
| 豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 | |||||
| 產(chǎn)品中文： | 豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 | ||||
| 產(chǎn)品英文： | PoFAine Hyaluronic acid,HA ELISA KIT | ||||
| 規(guī)格： | 48T/96T | ||||
| 保質(zhì)期： | 6個(gè)月 | ||||
| 保存條件： | 2到8度 | ||||
| 試劑盒組成: | |||||
| 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
| 5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
| 6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個(gè) |
| 豬HA試劑盒（透明質(zhì)酸）ELISA試劑盒全國質(zhì)保包郵 | |||||
| 樣本處理及要求： | |||||
| 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 | |||||
| 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。 | |||||
| 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 | |||||
| 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 | |||||
| 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 | |||||
| 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. | |||||
| 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根氧化物酶的（HRP）活性。 | |||||
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| 操作步驟 | |||||
| 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。 | |||||
| 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 | |||||
| 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 | |||||
| 4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 | |||||
| 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 | |||||
| 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 | |||||
| 7. 溫育：操作同3。 | |||||
| 8. 洗滌：操作同5。 | |||||
| 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. | |||||
| 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 | |||||
| 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 | |||||
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