微量還原型谷-胱甘肽(GSH)測定試劑盒

（微板法）

一、試劑組成與配制（96T）：

試劑一：沉淀劑， 20mL×1 瓶，室溫保存 6 個(gè)月。此為過飽和溶液，如有結(jié)晶，則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

試劑二：緩沖液， 20mL×1 瓶，2～8℃保存 6 個(gè)月。

試劑三：顯色劑， 5mL×1 瓶，2～8℃避光保存 6 個(gè)月。

試劑四：GSH 標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品粉劑，3.07mg×3 支；標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液，10mL×1 瓶），2～8℃保 存 6 個(gè)月。

GSH 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液配制：臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品溶劑貯備液：雙蒸水=1：9 稀釋，按所需量現(xiàn)用現(xiàn)配。

1mmol/LGSH 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制：GSH 的分子量為 307，每次測定前將 3.07mg 的 GSH 標(biāo)準(zhǔn)品加到 10mLGSH 的溶劑應(yīng)用液中，混勻，2℃～8℃可保存一周。

20μmol/LGSH 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制：取 1mmol/LGSH 標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2mL 加 GSH 標(biāo)準(zhǔn)溶劑應(yīng)用液 9.8mL。

二、樣本前處理

1、培養(yǎng)細(xì)胞：將收集好的細(xì)胞，用 PBS 清洗 1～2 次后，低速離心收集沉淀細(xì)胞，再加入 0.3～0.5mL （0.1M， PH 7.4）的等滲 PBS 緩沖液懸浮細(xì)胞，超聲或手動研磨破碎細(xì)胞后待測。

上清液制備：取破碎后的細(xì)胞懸液 0.1mL，加 0.1mL 試劑一混勻，3500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，

取上清液待測。

2、組織樣本：

10%勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積（mL）=1:9 的比例，加入 9 倍的生 理鹽水制成組織勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。

上清液制備：取 10%組織勻漿 0.1mL，加 0.1mL 試劑一混勻，3500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上 清液待測。

3 、血清（漿）樣本 ：

取血清（漿）0.05mL，加試劑一 0.2mL 混勻，3500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。

4、全血樣本：

10 倍溶血液的制備：取 0.1mL 肝素抗凝全血加雙蒸水 0.9mL，充分混勻，直至透亮為止。

上清液制備：取 10 倍溶血液 0.05mL，加 0.2mL 試劑一混勻，3500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上 清液待測。

五、標(biāo)準(zhǔn)曲線：（試劑盒靈敏度為 1.5μmol/L）

取一定量的 1mmol/L GSH 標(biāo)準(zhǔn)品用溶劑應(yīng)用液配制成不同濃度的 GSH 標(biāo)準(zhǔn)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：

100μmol/L、50μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、0μmol/L。

六、測定原理：

還原型谷-胱甘肽（GSH）可與二硫代*甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成一種黃色化合物，可

在 405nm 下進(jìn)行比色定量測定還原型谷-胱甘肽（GSH）含量。

七、檢測意義：

還原型谷-胱甘肽（GSH）是機(jī)體內(nèi)最重要的非酶性抗氧化物，具有清除自由基、解毒、促進(jìn)

鐵質(zhì)吸收及維持紅細(xì)胞膜的完整性、維持脫氧核糖核酸的生物合成、細(xì)胞的正常生長發(fā)育及細(xì)胞

免疫等多種重要生理功能。谷-胱甘肽是谷-氨酸、甘-氨酸和半胱-氨酸組成的一種三肽，是組織中主

要的非蛋白質(zhì)的巰基化合物，并且是 GSH-PX 和 GSH-ST 兩種酶類的底物，為這二種酶分解氫過 氧化物所必需，并能穩(wěn)定含巰基的酶和防止血紅蛋白及其它輔因子受氧化損傷。GSH 是一種低分 子清除劑，可清除 O2 -、H2O2、LOOH，因而 GSH 量的多少是衡量機(jī)體抗氧化能力的重要因素。

微量還原型谷-胱甘肽(GSH)測定試劑盒