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做Western Blot實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理

點(diǎn)擊次數(shù):3232     更新時(shí)間:2021-02-19

 做Western Blot實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理

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細(xì)胞樣本做WB檢測(cè)

1、懸浮細(xì)胞樣品:把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。

 

2、貼壁細(xì)胞樣品:

2.1 胰酶消化:用胰酶將細(xì)胞消化后,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。

 

2.2 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞:對(duì)于某些蛋白(即對(duì)胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測(cè)),直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞,收集到EP、15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測(cè)。

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