甲胎蛋白(AFP)放免檢測(cè)服務(wù)供應(yīng)-信帆生物

通用名：碘[125I]甲胎蛋白放射免疫分析藥盒
漢語(yǔ)拼音：Dian [125I] Jiataidanbai Fangshemianyifenxi Yaohe
英文名：Iodine [125I] Alphafetoprotein Radioimmunoassay Kit
簡(jiǎn)稱：碘[125I]- AFP 放免藥盒
[使用目的]
用于人血清樣本中甲胎蛋白(AFP)的定量測(cè)定
[試驗(yàn)原理]
血清中甲胎蛋白（AFP）的檢測(cè)主要用于1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌的診斷和監(jiān)測(cè)。AFP 的測(cè)定
為原發(fā)性肝細(xì)胞癌的早期診斷和監(jiān)測(cè)及肝癌流行病調(diào)查和理論研究提供了重要依據(jù)，是
用的腫瘤標(biāo)志物之一。2.通過血清及羊水AFP 的檢測(cè)對(duì)先天性胎兒畸形的早期診斷
有實(shí)用價(jià)值。
本品采用了第二抗體＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析試驗(yàn)原理：含甲胎蛋白（AFP）的樣
品和125I 標(biāo)記的甲胎蛋白（AFP）與相應(yīng)的抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。反應(yīng)后加入二
抗及PEG，使免疫復(fù)合物沉淀，離心，測(cè)沉淀放射性計(jì)數(shù)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本中AFP
的濃度。
[試劑主要組成成分]
1. AFP 標(biāo)準(zhǔn)品：一套共7 瓶，以不含AFP 的人血清為基質(zhì)，用時(shí)輕輕搖勻，2～8℃冷存。
AFP 標(biāo)準(zhǔn)品濃度
2.質(zhì)控血清：三瓶，0.5 ml／瓶，2～8℃冷存。
3.抗AFP 血清： 藍(lán)色溶液，2～8℃冷存。
4.125I-AFP 標(biāo)記物： 紅色溶液，2～8℃冷存。
5 分離劑：藍(lán)色溶液，充分搖勻后使用，2～8℃冷存。
[儀器]
1、γ－計(jì)數(shù)器
2、低溫離心機(jī)
3、恒溫水浴箱
[樣本要求]
110 微升人血清樣本。
采靜脈血5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉(zhuǎn)／分離心，取其上清液，放
A B C D E F G 單位
0 10 20 50 100 200 400 ng/mL
置玻璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲(chǔ)存6 個(gè)月。
嚴(yán)重溶血、高濃度的脂類、膽紅素對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。
[實(shí)驗(yàn)方法]
1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少30 分鐘以上才可進(jìn)行操作；
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào)，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)；
3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本100μl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中；
4、每管均各加入100μl 標(biāo)記物工作液；
5、每管均各加入100μl 抗體工作液，充分混勻；
6、37℃溫育3 小時(shí)；
7、每管均各加入500μl 分離劑后，充分混勻；
8、室溫放置30 分鐘后，離心3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液；
9、用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)；
10、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
操作流程(Assay Procedure)

[實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意]
1、γ-計(jì)數(shù)器本底計(jì)數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％；
2、加入放射性標(biāo)記物時(shí)，應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎，以避免造成放射性污染；
3、如果某一個(gè)樣本的測(cè)定值高于濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，用零標(biāo)準(zhǔn)品以1：2 或1：
4 的比例稀釋樣本后重新測(cè)試，測(cè)試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

[質(zhì)量控制]
每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每次實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果
的可靠性。
1、質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)；
2、曲線方程應(yīng)采用擬合方式；
3、重復(fù)樣本的測(cè)定結(jié)果相差在15％以內(nèi)。
如不能同時(shí)滿足以上條件，則此次試驗(yàn)結(jié)果無效，全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。

[測(cè)定結(jié)果的計(jì)算]
1、計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品（B~G）、質(zhì)控品和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品A 的比值
2、劑量-反應(yīng)曲線按“對(duì)數(shù)劑量-結(jié)合率對(duì)數(shù)”（Log(dose-Log(B/Bmax))數(shù)學(xué)模型或
四參數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合，通過每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的B/B0 和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；
3、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的濃度值，B/B0 不在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本及其濃度

[實(shí)驗(yàn)的局限性]
1、本品僅供體外診斷使用，只能用于人血清樣本的測(cè)定而不能用于其他體液樣本；
2、通過其它方法得到的AFP 值與本品測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性；

[產(chǎn)品性能指標(biāo)]
1、靈敏度：
取藥盒中校準(zhǔn)試劑A 點(diǎn)（0 劑量）作20 平行管，求其均值X 及偏差SD，從劑量—反應(yīng)
曲線上查出與X+2SD 相對(duì)應(yīng)的劑量值，確定為本藥盒的靈敏度（小檢出值），為

1.28ng/mL。
2、精密度：
精密度是質(zhì)量控制的基本參數(shù)，用批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)確定。要求批內(nèi)變異系
數(shù)< 10% ，批間變異系數(shù)< 15% 。
B/B0×100 = 標(biāo)準(zhǔn)或樣品(STD or Samples)(CPM)—NSB(CPM)
A 標(biāo)準(zhǔn)(STD)(CPM)—NSB(CPM)
×100
批內(nèi)變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 同時(shí)分別進(jìn)行多個(gè)復(fù)管一次測(cè)定中
的重復(fù)性，應(yīng)小于10%。
C1 C2 C3
批內(nèi)變異系數(shù)5.95% 6.43% 4.98%
批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%。
批間變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 在多次測(cè)定間的重復(fù)性，應(yīng)小于15%。
C1 C2 C3
批間變異系數(shù)7.27% 6.45% 4.51%
批間變異系數(shù)均小于15%。
3、測(cè)定范圍：
采用零標(biāo)準(zhǔn)品添加高濃度的AFP,確定本試劑盒的測(cè)定范圍為0～800 ng/ml
[注意事項(xiàng)]
1、全部試劑應(yīng)避光貯于2-8℃并在使用前應(yīng)在室溫下（17-27℃）平衡。
2、該產(chǎn)品在制備過程中所用的血清均經(jīng)檢測(cè)，他們對(duì)HBsAg、HIV 無反應(yīng)。但即使這樣也
不會(huì)保證對(duì)所有的傳染性因素進(jìn)行檢測(cè)。由于沒有一個(gè)明確的測(cè)試方法能*保證不會(huì)出現(xiàn)
HBsAg、HIV 或其他傳染病毒，所以所有的產(chǎn)品包括來自人體的物質(zhì)都應(yīng)按良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)
范，按疾病預(yù)防和控制中心的有關(guān)規(guī)定要求進(jìn)行預(yù)防。
3、樣本濃度過高，在分析前用保溫液稀釋，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4、血清正常值，僅供參考，使用單位應(yīng)建立自己實(shí)驗(yàn)室的正常值。
正常血清參考值＜20ng/ml

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