Tn5轉(zhuǎn)座酶供應-信帆生物

信帆生物供應Robust Tn5 轉(zhuǎn)座酶，產(chǎn)品供應，大家有需要可以隨時咨詢！

Robust Tn5 轉(zhuǎn)座酶

Robustnique

體外轉(zhuǎn)基因操作:

Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶可以將含有成對識別序列的雙鏈DNA段（如下圖所示）隨機整合到宿主細胞的基因組中。整合的過程分為兩步：

首先，Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶同含有選擇標記和識別序列的目標基因片段結(jié)合，形成轉(zhuǎn)座體（Transposome）；之后，通過轉(zhuǎn)化的方式將

轉(zhuǎn)座體導入宿主細胞，利用選擇標記篩選成功整合目標基因的宿主細胞。

核酸外切酶活性：50 μl反應體系中，20 U本酶與1 μg的pUC19質(zhì)粒于37°C下溫育4小時，DNA的電泳條帶無明顯變化。

RNase活性：50 μl反應體系中，100 U本酶與250 ng大腸桿菌rRNA于37°C溫育2小時，經(jīng)瓊脂糖電泳檢測，被降解的rRNA小于1%。

1. Zhou, M., Bhasin, A., and Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.

2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.

質(zhì)量控制檢測:

參考文獻:

應用:

概述：Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶是野生型Tn5轉(zhuǎn)座酶的高活性突變體，可以的將Tn5轉(zhuǎn)座子插入到目標序列。Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶識別Tn5

轉(zhuǎn)座子酶序列的內(nèi)端（inside end，IE）、外端（outside end，OE）和嵌合端（mosaic end，ME）序列，含有ME序列片段的體外轉(zhuǎn)

座效率高(1)。Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶的插入位點具有很高的隨機性(2) ，因此被廣泛的用于體外轉(zhuǎn)基因（外源基因整合到宿主細胞）和二代

測序建庫等領域。

來源：含有Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶序列的大腸桿菌菌株。

應用：體外轉(zhuǎn)基因（外源基因整合到宿主細胞），二代測序建庫。

貯存溶液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。

反應緩沖液：（隨酶提供）10x轉(zhuǎn)座反應緩沖液。

單位定義：1單位Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶指37°C條件下反應1小時，*切割1 μg含有識別序列的DNA段所需要的酶量。

重組酶

包裝:

濃度:

存儲:

25 U

1,000 U/ml

-20°C

該反應體系可根據(jù)需要進行放大。

1.2 充分混勻，室溫（25 °C ）放置30分鐘。

1.3 取1-4 μl反應產(chǎn)物進行后續(xù)的轉(zhuǎn)化實驗，反應產(chǎn)物也可放置于-20°C備用。

2 轉(zhuǎn)化

可以使用的轉(zhuǎn)化方法有電轉(zhuǎn)化，化學轉(zhuǎn)化等。轉(zhuǎn)化后利用選擇性標記篩選成功整合目標基因的宿主細胞。

1 轉(zhuǎn)座體（Transposome）的構(gòu)建*

1.1 準備如下反應體系：

成分

目標基因片段(含選擇標記和成對識別序列,100 μg/ml)

Robust Tn5轉(zhuǎn)座酶

100%甘油

體積

2 μl

4 μl

2 μl

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TnsABC*轉(zhuǎn)座酶可用在GPSTM系列系統(tǒng)中（GPS-1基因組測序系統(tǒng)，GPS-M突變系統(tǒng)和GPS-LS蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)）將pGPS質(zhì)粒中的Transprimer轉(zhuǎn)座元件體外隨機插入到任何期望的靶DNA內(nèi)(1-3)。
來源
三個組成蛋白分別從含有編碼TnsA、TnsB和TnsC*的質(zhì)粒的E.coliK-12中純化獲得。
應用
用于GPS系統(tǒng)中所用到的Tn7源轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)位。
反應緩沖液
1×GPSBuffer25mMTris-HCl,2mMATP,2mMDTT(pH8.0@25°C)。補充15mM鏈轉(zhuǎn)移反應起始溶液。37°C溫育。
單位定義
在用0.08µg2.8kb對照質(zhì)粒的標準對照反應體系中，能使至少1%的靶分子獲得轉(zhuǎn)座子插入所需要的酶量定義為一個單位。
熱失活：75°C10分鐘。

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