信帆生物：PCR技術(shù)服務(wù)升級！歡迎！

1.技術(shù)優(yōu)勢：

*靈敏度高，可以檢測低拷貝的目的基因

*高精度，PCR擴(kuò)增階段包括3個階段：指數(shù)增，線性增和平臺期，96個重復(fù)指數(shù)增表現(xiàn)出高精度，而平臺期則變化差異

*定量能力強(qiáng)，簡單的流程就能得到定量數(shù)據(jù)

*動力學(xué)范圍寬，可以定量9個數(shù)量級的差異，速度快，節(jié)省時間和勞力，不需要電泳檢測

*安全，使用熒光染料發(fā)光，不用EB或放射性物質(zhì)，降低對實驗人員健康的威脅

*重復(fù)性好

2.服務(wù)流程

PCR引物、探針設(shè)計合成調(diào)試→標(biāo)準(zhǔn)品制作→樣本核酸抽提反轉(zhuǎn)錄→PCR擴(kuò)增檢測→數(shù)據(jù)初步分析

3.檢測方法

   (1) SYBR Green Ⅰ

   游離狀態(tài)下的SYBR Green分子發(fā)出微弱的熒光信號，當(dāng)與dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合時，則發(fā)出綠色熒光，可在520nm波長下檢測熒光信號，熒光信號的強(qiáng)度與dsDNA數(shù)量呈正相關(guān)。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點(diǎn)：

   高靈敏度，低背景信號，操作簡單，不影響酶促反應(yīng)，價格便宜。

(2)探針法：TaqMan熒光探針，MGB探針

  TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團(tuán)，而淬滅劑則在3`末端，一般為TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA發(fā)出黃色熒光，BHQ1和BHQ2不發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

  TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性，常被用于SNP分型的研究中，有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。

  探針法的特點(diǎn)：

  與染料法相比具有更低的背景信號，更高的靈敏度，可以檢測低于10個分子的模板，更高的特異性，結(jié)果也更準(zhǔn)確。同時也具有染料法的操作簡單，不影響酶促反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。

◆核酸提取和反轉(zhuǎn)錄

根據(jù)客戶要求提取動物、植物、細(xì)胞和細(xì)菌等樣品DNA或RNA

對所提RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄以用于熒光定量PCR反應(yīng)

◆合成

設(shè)計合成各種引物并可根據(jù)客戶要求負(fù)責(zé)引物的調(diào)試

針對不同引物構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品用于定量或相對定量實驗

設(shè)計合成各種標(biāo)記探針并可根據(jù)客戶要求負(fù)責(zé)探針的調(diào)試

◆檢測

  mRNA表達(dá)檢測

   MicroRNA表達(dá)和靶基因表達(dá)檢測

   SNP檢測

   基因copy數(shù)檢測

   病原微生物樣品檢測

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