熱烈祝賀大連醫(yī)科大學(xué)付老師文章見(jiàn)刊，并且榮獲中國(guó)碩士學(xué)位論文，文章名稱：《恥垢分枝桿菌動(dòng)物模型的構(gòu)建及其與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用》，希望付老師以后能有更加的文章見(jiàn)刊。

文章中所用到的試劑盒是付老師在我們公司購(gòu)買(mǎi)的（信帆生物科技有限公司，Shanghai Xinfan Bio techology Co.,Ltd）


小鼠白介素10(IL-10)elisa試劑盒

小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒

小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa試劑盒

小鼠干擾素-γ(IFN-γ)ELISA試劑盒


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文章主要講述了：結(jié)核病（Tuberclosis）是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴(yán)重的呼吸道傳染病。結(jié)核病引起的后果對(duì)社會(huì)來(lái)說(shuō)是巨大的?，F(xiàn)在*三分之一的人口（約20億人）已經(jīng)感染了結(jié)核分枝桿菌，結(jié)核病占疾病的2.5%。盡管比起其他感染性疾病結(jié)核病的發(fā)病率有一個(gè)穩(wěn)固的下降，但是除非有重大的研究結(jié)果出現(xiàn)，結(jié)核病持續(xù)較高死亡率的情況將持續(xù)到2020年。艾滋病和其合并形成了一個(gè)致死性的疾病組合，互相能加速發(fā)病的進(jìn)程。這樣的情況說(shuō)明，結(jié)核病的發(fā)病與否與宿主的免疫系統(tǒng)有著非常密切的，因此結(jié)核病也成為世界關(guān)心的健康問(wèn)題。[1,2,3] 分枝桿菌屬包括大約100多種菌，其中包括能引起結(jié)核病的致病性分枝桿菌，如結(jié)核分枝桿菌；同樣還包括非致病性的分枝桿菌，如恥垢分枝桿菌。恥垢分枝桿菌是一種與結(jié)核分枝桿菌具有同源性、快速生長(zhǎng)、少量接種對(duì)豚鼠、大鼠、小鼠無(wú)致病性的分枝桿菌[4,5]。其細(xì)胞壁表面的有效抗原成分，如脂阿拉伯甘露糖（LAM）、脂蛋白（LP）及全細(xì)胞溶解物（Whole Cell Lysate,WCL），是與宿主免疫系統(tǒng)互相作用的分子[8,9]，這些分子是安全、有效的免疫調(diào)節(jié)劑，能有效地促進(jìn)免疫系統(tǒng)的Th1應(yīng)答[9]。 在闡明結(jié)核病發(fā)病機(jī)制、研發(fā)疫苗等實(shí)驗(yàn)研究中，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是zui有效和*的方法[13,17]。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了構(gòu)建恥垢分枝桿菌小鼠模型的方法，不但對(duì)小鼠的外部傷害減少的zui低程度，同時(shí)也更真實(shí)地模擬了感染結(jié)核分枝桿菌的方式，以此來(lái)探討高濃度（5×107CFU/day）恥垢分枝桿菌構(gòu)建小鼠模型的可行性。 本實(shí)驗(yàn)的目的： (1)本實(shí)驗(yàn)利用高濃度（5×107CFU/day）的非致病性恥垢分枝桿菌構(gòu)建小鼠模型，以微生物氣溶膠氣霧攻擊方式使小鼠肺部產(chǎn)生類結(jié)核狀病變，來(lái)探討利用此種方法、此種條件下，建模的可行性； (2)探討高濃度（5×107CFU/day）的非致病性恥垢分枝桿菌在持續(xù)感染的情況下使小鼠肺部產(chǎn)生病理?yè)p傷的原因； (3)探討恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁表面成分脂阿拉伯甘露糖（LAM）對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的刺激和調(diào)節(jié)作用； (4)探討恥垢分枝桿菌全細(xì)胞溶解物（WCL）對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的刺激和調(diào)節(jié)作用。 本實(shí)驗(yàn)的主要方法： (1)選擇近交系動(dòng)物中對(duì)分枝桿菌zui敏感的的C57BL小鼠，周齡為4-8周的雄性小鼠； (2)利用加入0.05%的Tween80LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155菌株； (3)利用M.Smegmatis mc2155的生長(zhǎng)曲線與OD589測(cè)定菌液的濃度； (4)提取野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155細(xì)胞壁表面物質(zhì)脂阿拉伯甘露糖（LAM）； (5) M.smegmatis mc2155WCL（Whole Cell Lysate，全細(xì)胞溶解物）的制備：菌體細(xì)胞與細(xì)胞裂解液37℃孵育10min，菌液進(jìn)行超聲破碎，功率200W，破碎30s，間歇30s；破碎20-30個(gè)循環(huán)； (6)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物C57BL小鼠隨機(jī)分成5組：空白組，S組，LS組， WS1組，WS2組。各組動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，自由飲食飲水，飼養(yǎng)條件保持恒溫恒濕，并定期通風(fēng)消毒。 (7)小鼠的處理：各組小鼠按如下方式制備感染物，利用微生物氣溶膠發(fā)生器制備感染物的氣溶膠懸液，以氣霧攻擊方式感染小鼠。S組：5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155；LS組：30μg/day LAM，預(yù)處理兩天，第三天開(kāi)始5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155處理；WS1組：全細(xì)胞溶解物：野生型M.smegmatis MC2155=1：1混合物；WS2組：全細(xì)胞溶解物：野生型M.smegmatis MC2155=9：1混合物。 (8)分別在第7、14、21、28天，各組隨機(jī)選擇3只小鼠：眼球取小鼠外周血，分離血清；檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-6、IL-10、GM-CSF四中細(xì)胞因子的水平；取肺部組織，一部分做病理切片觀察病理變化，另一部分用來(lái)檢測(cè)肺部組織中活菌的數(shù)量。 本實(shí)驗(yàn)的結(jié)論： (1)用氣霧攻擊方式，以5×107CFU/day的濃度構(gòu)建恥垢分枝桿菌C57BL小鼠模型是可行的； (2)高濃度（5×107CFU/day）的恥垢分枝桿菌持續(xù)感染而使小鼠產(chǎn)生肺部病理?yè)p傷的原因是Th1/Th2反應(yīng)失衡； (3)恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁成分LAM能激活Th1反應(yīng)具有免疫調(diào)節(jié)作用； (4) WCL與少量活菌混合后的免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于單獨(dú)使用LAM，為研發(fā)新的疫苗奠定基礎(chǔ)。