檢驗大腸桿菌

大腸桿菌O157:H7的測試片檢測方法
一、大腸桿菌快速檢驗測試片適用范圍：用于各類食品以及人體體檢樣品中大腸桿菌O157:H7的檢測。以及突發(fā)事件應(yīng)急檢測需要。

二、大腸桿菌的快速方法原理和方法：采用選擇性顯色培養(yǎng)基作為主要原料，加入專一性酶顯色劑，運(yùn)用微生物測試片技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，通過接種、培養(yǎng)，如果樣品中含有大腸桿菌O157:H7，即可在紙片上呈現(xiàn)紫紅色的菌落。 樣品處理：無菌操作取25g(mL)樣品放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，充分振搖或置均質(zhì)器中制成樣品勻液，靜置片刻。接種：將測試片水平放在臺面上，小心揭開上蓋膜，用滅菌吸管吸取1 mL樣品上清液或增菌液，均勻加到中央的濾紙片上，然后輕輕將上蓋膜放下，靜置5min。每個樣品接種兩片。培養(yǎng)：將加了樣的測試片疊放在一起，放入原來的自封袋中，堆疊片數(shù)不超過12片，透明膜向上平放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15h～24h。呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7;呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。

三、 注意事項：本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測，用取樣棉簽涂抹被測物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測試片上。注意使用過的紙片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，zui-好用其他更為的方法進(jìn)行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。

大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試方法
大腸桿菌耐熱檢驗方法適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗；其原理是：利用耐熱大腸菌群是總大腸菌群的一部分.將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌(E.coli) 是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運(yùn)用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)的顯色底物(XGLUC/blue)，以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶(galactosidase)的顯色底物(SalmonGal/red), 經(jīng)過44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍(lán)色，紅色或紫藍(lán)色菌斑都屬耐熱大腸菌群。

大腸桿菌的快速檢驗方法對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2-3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍(lán)色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性，其中紫藍(lán)色為大腸埃希氏菌陽性。沒有紅色或紫藍(lán)色斑點為陰性結(jié)果。